- ベクター配列ファイルを（例「pColdV.gbk」）読み込みます。
- 「RE Recognition」ボタンをクリックします。
- 「Enzyme Selection」Window が表示されます。
- 「EcoRV」を選択し、「Show Recognition Site」をクリックします。
- 「Recognition Site」Window が表示され、左側に制限酵素毎の認識部位数が表示されます。
- 「EcoRV」にチェックを入れます。
- 右側のサイトにチェックし、「Digestion」ボタンをクリックします。
- 「はい(Y)」をクリックします。
- 断片にチェックし、「Load」ボタンをクリックします。
- Directory Chooser が表示されます。
- ディレクトリ名を指定し、「OK」をクリックします。
- 「Completed!!」確認メッセージが表示されます。
- 「Add T-base」ボタンをクリックします。
- 「Add T-Base to both 3’end」確認メッセージが表示されます。
- 「はい(Y)」をクリックします。
- 線状ベクターの３‘両末端にチミンが１個付加されます。